細胞凋亡的檢測方法眾多體系，流式細胞儀檢測凋亡深入交流研討，是常用的方法大力發展。由于流式細胞儀固有的特點――可以準確的進行凋亡細胞的計數(shù)更默契了。因此，具有其它方法*的*性引領。下面我們就簡單明了地介紹流式在檢測凋亡方面的應用自動化裝置。
在凋亡誘導劑的作用下，首先是細胞色素C和apa f-1形成復合體，線粒體的功能發(fā)生衰退;后是caspase家族激活有很大提升空間，磷脂酰絲氨酸外翻運行好，這時細胞的形態(tài)已經(jīng)發(fā)生了改變，可以看到細胞變小可能性更大，胞核皺縮;zui后是細胞內(nèi)DNA斷裂部署安排，形成凋亡小體。
在凋亡發(fā)生的各個過程當中技術，都有相應的流式細胞儀的檢測方法推廣開來，可以采用以下檢測方法：
1、線粒體功能
2相對較高、DNA Cycle
3資源配置、Caspases
4、Annexin V Assay
5姿勢、DNA Fragmentation Assays
基本上涵蓋了細胞凋亡的各個期相互融合，對各種檢測方法的原理和特點做一個簡單介紹。
線粒體功能檢測的試劑盒有深圳達科為公司代理的試劑盒(產(chǎn)品編號為BVK250)和BD公司出售的盒Apo-Alert試劑盒綠色化。其檢測主要采用陽離子型熒光染料。原理是：正常細胞中發展，染料可以在線粒體內(nèi)聚集建設應用，發(fā)出明亮的紅色熒光;而細胞凋亡后，其線粒體膜電位發(fā)生改變日漸深入，染料無法進入線粒體動力，只能在胞質(zhì)中以單體形式存在，發(fā)出綠色的熒光互動式宣講⌒Ц咝?？梢栽跓晒怙@微鏡下，或流式檢測自動化。采用488nm激發(fā)提升，其檢測波長分別是527nm和590nm。整個實驗過程操作簡單不折不扣，只需要30min就可以見到結(jié)果支撐能力。
Caspase家族可以檢測的分子非常多，也有不少商業(yè)的試劑盒可以應用高效利用。即使沒有相應的試劑盒特征更加明顯，只要有相應抗體基本上是可以檢測的，具體的方法是參照細胞內(nèi)蛋白檢測的步驟講理論。
在細胞凋亡過程中伴隨著一系列的形態(tài)特征改變的可能性，細胞膜的改變是這些特征中較早出現(xiàn)的一種。在凋亡細胞中，細胞膜磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的外側(cè)問題。Annexin-V是一種35-36 KD的鈣粒子依賴的磷脂結(jié)合蛋白大大縮短，它對PS具有較高的親和力。細胞凋亡時緊密相關，可以和外翻的PS結(jié)合更默契了，從而可以檢測凋亡的細胞。發(fā)生死亡的細胞其細胞膜上的PS也外翻培訓，因而也會陽性不合理波動。因此，常用的凋亡試劑盒除了采用Annexin-V標記之外重要工具，還會加一種DNA染料積極拓展新的領域，常用的有PI和7-AAD，由于死亡的細胞膜通透性增高更優質，染料可以進入細胞內(nèi)和DNA結(jié)合相對開放，從而可以發(fā)熒光，區(qū)分出死細胞領域。
下圖給出的是在使用FAS單抗誘導前后的檢測結(jié)果溝通機製，橫坐標是Annexin-V FITC, 縱坐標是PI，左上註入新的動力、右上領先水平、左下、右下四個象限中右上象限代表死亡的細胞雙重提升，左下象限是存活的細胞戰略布局，右下象限是凋亡的細胞。
在采用Annixin V方法檢測凋亡細胞時表現明顯更佳，要特別強調(diào)一點：該方法適用于懸浮生長的細胞狀態，如：淋巴細胞等細胞的檢測。對于貼壁生長的細胞指導，由于在胰酶等消化處理過程中會造成細胞膜的損傷廣泛認同，會造成較高的假陽性，從而影響檢測結(jié)果增持能力。盡管目前共同努力，包括國外也有一些單位采用該方法檢測貼壁生長的細胞。我不推薦用該方法檢測追求卓越。因為其重復性較差逐漸完善，且需要操作時非常小心。
DNA周期檢測原本是用來反應細胞各個期合理需求，即細胞增殖狀況的是目前主流。利用細胞內(nèi)DNA能夠和熒光染料充分發揮，如PI結(jié)合的特性。細胞各個時期由于其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同充分發揮，流式檢測的熒光輕度也不一樣選擇適用。G2-M期DNA含量是G0-G1的兩倍，而S期介于兩者之間設計。
但是由于發(fā)現(xiàn)凋亡的細胞DNA含量較少業務指導，因而可以在細胞G0-G1期前面有一個亞二倍體峰，從而認為是凋亡細胞就此掀開。但是由于死亡的細胞本身其DNA含量也是減少的長足發展，因而非常難于區(qū)分凋亡和死亡的細胞。在90年代穩步前行，該方法曾經(jīng)風靡一時實施體系，現(xiàn)在看來，那時的實驗結(jié)果需要推敲各有優勢。盡管效果較好，經(jīng)典的流式檢測資料給出的圖是認為凋亡的細胞是緊挨著G0-G1期峰的一個峰，死亡的細胞峰離G0-G1期峰較遠持續，但是這種典型的結(jié)果似乎很難獲得等多個領域。有其它的替代方法，*可以不用這種方法高質量。
晚期凋亡的細胞由于DNA的斷裂提供了有力支撐，因而可以出現(xiàn)DNA ladder，從而也就有了經(jīng)典的檢測方法TUNEl前景。流式也能進行Tunel檢測，其檢測原理與經(jīng)典Tunel原理基本一致增幅最大。以BD公司的為例共享應用，其利用TdT能將熒光素標記的dUTP標記到斷裂的DNA末端，從而使凋亡的細胞具有熒光標準。但是由于在細胞內(nèi)標記示範推廣，細胞需要進行固定處理，操作類似免疫組織化學法即將展開，容易造成假陽性大幅增加。建議采用原裝大廠的試劑盒，并且嚴格的設立對照傳承。經(jīng)過預實驗方法穩(wěn)定后再進行大規(guī)模實驗等特點。標本處理后，均可以用熒光纖維鏡進行觀察多種，拍照將進一步。流式檢測后，可以進行的計算凋亡百分比。這一點成就，經(jīng)典TUNEl是做不到的重要方式。