誤區(qū)一：儀器通道越多越好隨著PCR技術(shù)的成熟運(yùn)用系統，多重?cái)U(kuò)增越來越熱鬧幅度，熒光定量PCR儀也不能幸免。從zui初ABI公司推出的單通道熒光定量PCR儀發(fā)展到如今各個(gè)廠家都推出4通道機遇與挑戰、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀發揮重要作用，眼花繚亂的選擇讓人無所適從醒悟，就有人一不小心走進(jìn)了“通道越多越好”的誤區(qū)。在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時(shí)高質量，為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的性和準(zhǔn)確性都要在實(shí)驗(yàn)中使用ROX(一種熒光染料)或的Reference dye 也逐步提升，這些熒光染料都必須單獨(dú)使用一個(gè)檢測通道記得牢。這樣以來，真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個(gè)重要的作用，而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本更多可能性。有的熒光定量PCR的檢測通道是只為自已廠家的的熒光染料或試劑開放的，有效檢測通道也絕非像宣傳資料中宣稱的那么多足夠的實力。在購買前確認(rèn)熒光定量PCR儀器的有效檢測通道尤為重要重要性，不能單單只聽宣傳∮兴嵘?？紤]多重?zé)晒舛縋CR的通道數(shù)的時(shí)候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā)聽得進，多重PCR并非人人適用、人人可用先進水平，因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了便利性。

　　誤區(qū)二：real-time PCR儀無需梯度功能對于使用染料法的定量PCR反應(yīng)，雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計(jì)軟件或者經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算熔解溫度(Tm值)重要平臺，但運(yùn)用的公式不同深刻認識、引物序列不同，Tm值的差異會很大應用提升。引物的熔解溫度決定了退火溫度主動性。而且模版中堿基的組合千變?nèi)f化，對于特殊片斷發展的關鍵，經(jīng)驗(yàn)公式得到的數(shù)據(jù)不一定能得出準(zhǔn)確的結(jié)果道路，退火溫度細(xì)微的差異對結(jié)果都可能產(chǎn)生決定性的影響，因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問題真諦所在。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問題——在反應(yīng)過程中每個(gè)孔的溫度控制條件可以在范圍內(nèi)按照梯度變化指導，根據(jù)結(jié)果，一步就可以摸索出的反應(yīng)條件充分。不單退火溫度進一步完善，連變性溫度和延伸溫度都可以優(yōu)化——對于多種聚合酶混合酶擴(kuò)增如Invitrogen、Clontech競爭力、Promega的多數(shù)高保真Taq酶來說這個(gè)非常重要調整推進，因?yàn)門aq和校正酶的*反應(yīng)溫度可能有顯著差異，優(yōu)化延伸溫度就顯得很重要機製性梗阻。